Razlika med PCR in PCR v realnem času

PCR vs PCR v realnem času

Verižna reakcija PCR ali polimeraza je revolucionarno odkritje v sodobni molekularni biologiji, ki jo je prvič razvil kemik Kary Mullis leta 1983. Omogoča, da se za analizo poveča eno zaporedje v kompleksni DNK. Osnovna ideja PCR je, da sta dva primera, ki se dopolnjujeta nasprotujočim si sklopom DNA sekvence, usmerjena drug proti drugemu; osnovni premazi proizvajajo komplementarne pramene, pri čemer vsak vsebuje drugi temeljni premaz. Rezultat je torej velika količina zaporedja, ki ustreza DNK, ki leži med obema prajmerjema. Enzim DNK polimeraza se uporablja za podaljševanje primerov v PCR. DNK polimeraza je termostabilni encim in ima sposobnost preživetja pri visokih temperaturah (94 do 95 ° C), ki se uporabljajo za denaturacijo šablonske DNK.

PCR vključuje tri korake, in sicer ponavljajoče se kroge denaturacije, žaritve prajmerjev in sinteze DNK. Za izvedbo te reakcije se uporablja stroj s termociklirji, ki omogoča programiranje hitro in natančno spreminjanje temperatur. Uporaba PCR so kriminalistične preiskave, odtis prsta na DNK, odkrivanje patogenov in analiza DNK zgodnjih človeških vrst.

Kaj je običajni PCR?

Obstajajo tri glavne stopnje običajnega PCR, in sicer; Stopnja amplifikacije DNA, ločitev PCR in odkrivanje produktov. Ločevanje segmentov DNK običajno izvajamo z elektroforezo z agaroznim gelom. Izdelke nato obarvamo z etheiduim bromidom. Končno odkrivanje dosežemo z vizualizacijo trakov na gelih pod UV svetlobo. Zato končni rezultati običajnega PCR niso izraženi kot številke. Običajno je PCR zaznati samo en parameter.

Kaj je PCR v realnem času?

PCR v realnem času lahko zazna ojačanje izdelkov, saj se izdelki sintetizirajo. PCR je z razvojem tehnologije postal zelo priljubljena tehnika, zlasti za odkrivanje in prepoznavanje bakterij v živilih. PCR v realnem času uporablja florescentni sistem barvanja in termocikler, opremljen s fluorescentno zaznavo.

Kakšna je razlika med običajnim PCR in PCR v realnem času?

• Konvencionalni PCR traja več časa, saj za analizo ojačenih PCR izdelkov uporablja gel elektroforezo. V nasprotju s tem je PCR v realnem času manj zamuden, saj lahko zazna ojačitve v zgodnjih fazah reakcije.

• PCR v realnem času zbira podatke v fazi eksponentne rasti PCR, medtem ko tradicionalni PCR zbira podatke v končni točki reakcije.

• Rezultati končne točke PCR morda niso zelo natančni, vendar so rezultati PCR v realnem času zelo natančni.

• PCR v realnem času je bolj občutljiv kot običajni PCR.

• Običajni PCR ima zelo slabo ločljivost, medtem ko PCR v realnem času lahko zazna zelo majhne spremembe zaradi visoke ločljivosti.

• Zaznavanje končne točke običajnega PCR ima kratek dinamični razpon, medtem ko zaznavanje PCR v realnem času ima širok dinamični razpon.

• Za razliko od običajnih PCR, v PCR v realnem času najdemo tehnike samodejnega odkrivanja.

• Konvencionalni PCR je zelo izpopolnjen in delovno intenziven več kot PCR v realnem času.

• Za razliko od PCR v realnem času običajni PCR ne more razlikovati med mrtvimi in živimi bakterijami.

• PCR v realnem času uporablja fluorescenčni sistem za barvanje za zaznavanje izdelkov, medtem ko običajni PCR uporablja etidij bromid in UV svetlobo za vizualizacijo pasov v agaroznem gelnem mediju.