Razlika med nitrocelulozo in PVDF

Ključna razlika - nitroceluloza proti PVDF
 

Western blotting je metoda, ki omogoča odkrivanje in količinsko določitev specifičnih beljakovin iz vzorca beljakovin. Zanesljivost tehnike je odvisna od izbire pravilne membrane za absorpcijo beljakovin iz gela. Obstajajo različne vrste mikroporoznih membran. Nitrocelulozne in PVDF membrane sta dve taki membrani, ki ju raziskovalci najraje izkoriščajo zaradi svojih posebnih lastnosti drugih vrst membran. Izbira med nitrocelulozo ali PVDF je še en izziv pri zahodnem piku. Tako nitroceluloza kot PVDF imata visoko sposobnost absorpcije beljakovin. Ključna razlika med nitrocelulozo in PVDF membrano je v tem membrane z nitrocelulozo nimajo sposobnosti odstranjevanja protiteles in ponovne uporabe membrane za reprobacijo protiteles, medtem ko imajo PVDF membrane odstranjevanje in ponovno uporabo.

VSEBINA
1. Pregled in ključne razlike
2. Kaj je nitroceluloza
3. Kaj je PVDF
4. Primerjava ob strani - nitroceluloza proti PVDF
5. Povzetek

Kaj je nitroceluloza?

Nitroceluloza je polimer, ki se proizvaja z obdelavo celuloze z dušikovo kislino in se uporablja za izdelavo mikroporoznih membran v molekularni biologiji, zlasti za tehnike peskanja, kot so južno, severno in zahodno pikanje. Velikosti por nitroceluloznih membran se gibljejo od 3 do 20 µm. Nitrocelulozne mikroporozne membrane olajšajo zaznavanje imunokemične reakcije, ki se dogaja na površini membrane. Zato se nitrocelulozne membrane pogosto uporabljajo za imobilizacijo beljakovin in odkrivanje specifičnih beljakovin pri blottingu. Nitrocelulozne membrane lahko tudi imobilizirajo glikoproteine ​​in nukleinske kisline.

Nitrocelulozne membrane so prednostne pri preskusih s stranskim tokom zaradi več značilnosti. Nitrocelulozne membrane absorbirajo beljakovine v visoki koncentraciji. Topilo, ki se uporablja za vlaženje membrane, ne zmanjšuje absorpcije beljakovin nitrocelulozne membrane. Nitrocelulozne membrane lahko enostavno razrežemo na želeno velikost gela in z električnim ali kapilarnim prenosom prenesemo beljakovine iz gela na membrano. Nitroceluloza omogoča hitrejši pretok beljakovin skozi membrano z visokim potencialom vezave. Nitroceluloza kaže izboljšano trdnost pri ravnanju. Še en poseben atribut nitrocelulozne membrane je, da ga je mogoče enostavno lepiti z netopnimi vodoodpornimi lepili na različne plastične podlage.

Slika 01: Nitrocelulozna membrana za Western blot

Kaj je PVDF?

Poliviniliden difluorid (PVDF) je fluoropolimer, ki nastane s polimerizacijo viniliden difluorida in ima visoko sposobnost imobilizacije beljakovin. Zato se mikroporozne membrane, ki so narejene iz PVDF, uporabljajo v tehniki vesnega blotiranja za analizo specifičnih beljakovin iz mešanic beljakovin. Membrane PVDF se lahko uporabljajo tudi za analizo aminokislin in zaporedje beljakovin. Najpomembnejša značilnost PVDF membrane nad nitrocelulozno membrano je, da se lahko protitelesa odstranijo in ponovno uporabijo za kasnejše sonde protiteles.

Membrane PVDF so debelejše od nitroceluloznih membran; torej bolj odporen na poškodbe med ponovno uporabo. Membrane PVDF so zelo hidrofobne. Zato jih je treba pred uporabo namočiti v metanolu ali izopropanolu.

Kakšna je razlika med nitrocelulozo in PVDF?

Nitroceluloza vs PVDF
Nitroceluloza je polimer, sestavljen iz celuloze.	PVDF je fluoropolimer, ki nastane s polimerizacijo viniliden difluorida.
Velikost pora membrane
Običajne velikosti por so 0,1, 0,2 ali 0,45 μ	Običajne velikosti por so 0,1, 0,2 ali 0,45 μm
Kapaciteta vezave na beljakovine
Nitroceluloza ima sposobnost vezanja beljakovin od 80 do 100 µg / cm2.	PVDF ima sposobnost vezave beljakovin od 170 do 200 µg / cm2.
Občutljivost
Ta ima v primerjavi s PVDF majhno občutljivost.	Ta ima visoko občutljivost.
Zaznavanje nizko eksprimiranih beljakovin
Ker je občutljivost na nitrocelulozne membrane majhna, ni primerna za odkrivanje nizko eksprimiranih beljakovin.	To je bolj primerno za odkrivanje nizko izraženih beljakovin zaradi visoke občutljivosti.
Hrup v ozadju
To ima manjši hrup v ozadju	To ima večji hrup v ozadju.
Interakcije z beljakovinami
Proteinske molekule se preko hidrofobnih interakcij vežejo na nitrocelulozne membrane.	Beljakovine se vežejo na membrane PVDF s pomočjo hidrofobnih in dipolnih interakcij.
Narava membrane
Nitroceluloza je krhka in krhka. Vendar pa so na voljo različice nitroceluloze in so odporne.	PVDF je bolj trpežen in ima večjo kemično odpornost.
Sposobnost odstranjevanja in ponovne uporabe
Nitroceluloza ima lahko težave pri odstranjevanju in popravljanju, ne da bi izgubila signal.	PVDF je idealen za oprijem in zaporedje aplikacij.
Primernost
Nitroceluloza je idealna za odkrivanje beljakovin z nizko molekulsko maso.	PVDF je bolj primeren za zaznavanje beljakovin z večjo molekulsko maso.
Druge uporabe
Nitrocelulozo lahko uporabimo za analizo nukleinske kisline in zapiranje pik / reže.	PVDF se lahko uporablja za sekvenciranje beljakovin in trde faze za testiranje.
Cena
To je ceneje od membran PVDF.	Ta je dražja od nitroceluloznih membran.
Potreba po predhodnem vlaženju
Za nitrocelulozne membrane ni potrebno predhodno namakanje z metanolom	Membrane PVDF zahtevajo predhodno namakanje z metanolom.

Povzetek - Nitroceluloza proti PVDF

Nitrocelulozne membrane so bile prve membrane, ki so bile komercialno uporabljene za preskus bočnega pretoka. Imajo visoko sposobnost absorpcije beljakovin. Zato se pri zahodnem piku uporabljajo nitrocelulozne membrane. PVDF je še ena vrsta membrane, ki se uporablja pri zahodnem pivanju in ima tudi visoko sposobnost absorpcije beljakovin. Obe vrsti se uporabljata v western blotu za analizo beljakovin. Vendar imajo PVDF membrane več posebnih lastnosti, zaradi česar so bolj primerne kot nitrocelulozne membrane za zahodno pikanje. Toda nitrocelulozne membrane so bolj primerne za odkrivanje beljakovin z nizko molekulsko maso, PVDF membrane so bolj primerne za zaznavanje visoko molekularnih tehtanih beljakovin. To je razlika med nitrocelulozno in PVDF membrano.

Vljudnost slik:
1. "Western blot transfer" avtorja Bensaccount na angleški Wikipediji (CC BY 3.0) prek Wikimedije Commons

Referenca:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun in Thomas A. Neubert. „Uporaba nitroceluloznih membran za karakterizacijo beljakovin z lasersko desorpcijsko / ionizacijsko masno spektrometrijo z matriko.“ Analitična kemija. Ameriška nacionalna medicinska knjižnica, 15. julij 2006. Splet. 28. marec 2017
2. "Molekularni markerji in biotehnologija rastlin." Google Knjige. N.p., n.d. Splet. 28. marec 2017
3.Monday, 8. aprila 2013 Tweet. "Čarovniki v membrani: izbrati modro za najboljše rezultate na zahodnem bloku." Biokomparate. N.p., 08. aprila 2013. Splet. 28. marec 2017