Razlika med RT-PCR in QPCR

Verižna reakcija reverzne transkripcije s polimerazo (RT-PCR)

RT-PCR v primerjavi s QPCR

Zaradi napredka na področju biotehnologije se je z leti odkrilo več načinov za spopadanje s potrebami po presaditvah organov. Pred tem je lahko posameznik, ki bi prostovoljni daroval kateri koli organ takoj po smrti bolniku v stiski, začel samo operacijo za presaditve. Nenehne študije in raziskave biologov vodijo k odkritju matičnih celic.

Matične celice se nanašajo na tiste, ki so bile odvzete iz DNK zarodka, ki bodo služile kot vir za regeneracijo celic, ki bi bil v bistvu klon organa, v katerem je bila pridobljena DNK. Medtem ko aktivisti za človekove pravice lobirajo za zaustavitev takšnih postopkov, so uspešne operacije dejansko dokazale učinkovitost razvoja matičnih celic pri presaditvah organov.

Preden pa lahko cenimo in v celoti razumemo matične celice, je treba seznaniti različne terminologije, povezane s tem znanstvenim odkritjem. Gojenje matičnih celic se ukvarja z DNK in njegovim kodiranjem. Tako je za študente ali vse posameznike, ki jih zanima to področje, pomembno razlikovati med RT-PCR in qPCR.

Verižna reakcija s povratno transkripcijo (RT-PCR) je ena od mnogih variant verižne reakcije polimeraze ali PCR. Ta laboratorijska tehnika se široko uporablja v molekularni biologiji, da lahko znanstveniki ustvarijo več kopij določenega zaporedja DNK s postopkom, skovanim kot "pomnoževanje". Razlika med RT-PCR in tradicionalnim PCR je v tem, da se RNA najprej prepisuje vzvratno v svoj DNA komplement, ki uporablja obratno transkriptazo. Nova komplementarna DNA, ki vsebuje obrnjeno transkripcijo, bo nato amplificirana z uporabo tradicionalnega PCR ali PCR v realnem času..

Večina študentov, ki preučujejo ta postopek, pogosto stori napako pri izmenjavi PCR povratne transkripcije in PCR v realnem času, saj se oba skrajšata. Da se izognemo zmedi, biologi PCR v realnem času označijo kot količinsko PCR v realnem času ali qPCR.

QPCR se močno razlikuje od RT-PCR, saj je qPCR odgovoren za merjenje ojačanja, ko se pojavi. Lahko rečemo, da RT-PCR začne proces amplifikacije, qPCR pa ga meri, ko postopek poteka.

Kvantitativni PCR v realnem času

QPCR je dejansko spremenil tradicionalni način enosmernega pristopa, ko gre za količinsko določanje DNK in RNK, saj uporaba metode qPCR omogoča biologom, da določijo začetno koncentracijo nukleinske kisline, še preden so opazili rezultate reakcije in zapisal navzdol.

Uporaba qPCR, ki danes velja za najmočnejšo in občutljivo tehniko analize za genetske študije, se je močno razširila. Trenutno je vključen v kvantitativno analizo genske ekspresije, genotipizacijo, odkrivanje patogenov in analizo SNP, skupaj z meritvami motenj RNA..

QPCR se pogosto kombinira s postopkom povratne transkripcije za količinsko opredelitev mesnarske RNA in mikroRNA, ki sta prisotna v celicah tkiv, ki so jih opazovali in z njimi eksperimentirali. To potem daje še eno vidno razliko med obema: za proces amplifikacije se lahko uporabi RT-PCR, vendar ga je treba za namene kvantifikacije zliti z qPCR..

QPCR je tudi znano bolj kvantitativno, saj se podatki lahko zbirajo, ko faza eksponentne rasti (log) PCR napreduje. Biologi ugotavljajo, da je količina stranskega produkta PCR neposredno sorazmerna s količino nukleinske kisline v šabloni, ki jo bomo izmerili s pomočjo qPCR.

Po drugi strani RT-PCR še zdaleč ni kvantitativne narave, saj lahko upoštevanje intenzivnosti ojačanega pasu na gelu, ki sledi določenemu standardu koncentracije, vodi do "polkvantitativnega" sklepanja.

Povzetek:

1.QPCR in RT-PCR sta izraza, ki se uporabljata v biotehnologiji in uporabljata za izdelavo več kopij DNK.
2.RT-PCR se uporablja za povečanje obrnjene transkripcije kode DNK; QPCR meri ojačanje.
3.RT-PCR je za povečanje, qPCR pa za kvantifikacijo.
4.QPCR je kvantitativne narave, medtem ko RT-PCR ni.