Izraza zlaganje gela in ločevalni gel se uporabljata pri razlagi tehnike SDS-PAGE. SDS-PAGE ali elektroforeza z natrijevim dodecil sulfat-poliakrilamidom je laboratorijska tehnika, ki se uporablja za ločevanje molekul beljakovin glede na njihovo molekularno maso. Teorija te tehnike je, da beljakovine z različno molekulsko maso kažejo različne stopnje migracije; Molekule z nizko molekulsko maso migrirajo hitreje, medtem ko molekule z visoko molekulsko maso migrirajo počasi. Medij za migracijo je gel. Obstajata dve vrsti gelov, imenovanih gel za zlaganje in ločevalni gel. The ključna razlika med gelom za zlaganje in ločevalnim gelom je to pH gela za zlaganje je 6,8, pH pa ločevalnega gela 8,8.
1. Pregled in ključne razlike
2. Kaj je gel za zlaganje
3. Kaj je ločevalni gel
4. Razmerje med zlaganjem gela in ločevalnim gelom
5. Primerjava drug ob drugem - Zlaganje gela in ločevalnega gela v obliki tabele
6. Povzetek
Gladilni gel je nizko koncentrirani poliakrilamidni gel, ki je v SDS-PAGE tehniki nameščen na vrhu bolj koncentriranega ločevalnega gela (ločevalnega gela). Zlagalni gel se uporablja za izboljšanje ločljivosti elektroforeze. Ločljivost se poveča zaradi razlike med koncentracijami gela za zlaganje in ločevalnim gelom, ki vplivajo na beljakovine v vzorcu. Ker je koncentracija poliakrilamida v zložljivem gelu nizka, je velikost por večja. To pomaga tudi pri povečanju ločitve.
Gladilni gel je ohlapen poliakrilamidni gel z velikimi porami približno 7% poliakrilamida. Te pore ne delujejo kot velika ovira za velike molekule beljakovin. Zato ta gel nekoliko vpliva na gibljivost teh beljakovin. Tako ločimo glede na gibljivost in velikost beljakovin, tako da jih koncentriramo med dva gela.
Slika 01: SDS-PAGE akrilamidni gel
PH gela za zlaganje je 6,8. Njegov pH je kisel kot pH za raztapljanje gela za 2 pH enoti. Ta pH pomeni nižjo ionsko trdnost in s tem večji električni upor. To izzove gibljivost beljakovin kot drugi nabiti delci, ki so prisotni v gelu.
Ločevalni ali ločevalni gel SDS-PAGEtechnique je visoko koncentriran poliakrilamidni gel, ki je nameščen na vrhu nizko koncentriranega gela za zlaganje. Ločevalni gel vsebuje veliko količine poliakrilamida (10%). PH tega gela se vzdržuje kot pH = 8,8, kar je višji nivo pH kot tisti za zlaganje gela.
Slika 02: Aparat za elektroforezo z geli
Ko beljakovinske molekule dosežejo ločevalni gel, se migracija teh molekul upočasni, ker je ločevalni gel visoko koncentracijski gel z majhno velikostjo por, ki lahko deluje kot velika ovira za gibanje beljakovinskih molekul. Ta upočasnitev omogoča, da se drugi proteini počasi selijo, da se ujamejo, kar ima za posledico ozek koncentriran pas med obema geloma.
Zlaganje gela proti ločevalnemu gelu | |
Gel za zlaganje je nizko koncentrirani poliakrilamidni gel, ki je v SDS-PAGE tehniki nameščen na vrhu bolj koncentriranega ločevalnega gela (ločevalni gel). | Ločevalni gel ali ločevalni gel tehnike SDS-PAGE je visoko koncentriran poliakrilamidni gel, ki je nameščen na vrhu nizko koncentriranega gela za zlaganje. |
Umestitev | |
Gladilni gel se namesti na ločilni (ločevalni) gel. | Ločevalni gel je nameščen na dnu posode, ki se uporablja za elektroforezo gela. |
Koncentracija | |
Koncentracija gela za zlaganje je visoka. | Koncentracija ločevalnega gela je nizka. |
Vsebnost poliakrilamida | |
Gladilni gel vsebuje približno 7% poliakrilamida. | Ločevalni gel vsebuje približno 10% poliakrilamida. |
pH | |
PH gela za zlaganje je 6,8. | PH ločevalnega gela je 8,8. |
Velikost por | |
V gelih za zlaganje so prisotne velike velikosti por. | Majhne velikosti por so prisotne v ločevalnem gelu. |
Resolucija | |
Zlaganje gela daje boljšo ločljivost. | Ločevalni gel daje slabo ločljivost. |
Zlaganje in ločevalni gel sta dve vrsti poliakrilamidnih gelov, ki se uporabljata za boljše ločevanje molekul beljakovin v danem vzorcu. Razlika med gelom za zlaganje in ločevalnim gelom je, da je pH gela za zlaganje 6,8, pH pa ločevalnega gela 8,8.
1. "Poliakrilamidna elektroforeza z geli." Poliakrilamidna elektroforeza v gelih (teorija): Molekularna biologija Virtualni laboratorij II: Biotehnologija in biomedicinsko inženirstvo: Amrita Vishwa Vidyapeetham Virtual Lab. Na voljo tukaj
2. "Kako deluje SDS-STRAN" Bitesize Bio, 16. februar 2018. Na voljo tukaj
3. "SDS-PAGE gel za zlaganje - BICH 608 (Polymenis-Pettigrew)." Google Spletna mesta. Na voljo tukaj
1.'SDS-PAGE Acrylamide gel'By Bensaccount na angleški Wikipedia, (CC BY 3.0) prek Commons Wikimedia
2. "Aparat za elektroforezo gela" avtorja Jeffrey M. Vinocur - lastno delo (CC-BY 2.5) prek Commons Wikimedia