Razlika med papirno tanko plastjo in kromatografijo na stolpcih
Share
Ključna razlika - Paper vs Thin Layer vs Stolpec Kromatografija
Papirna kromatografija, tankoslojna kromatografija in stolpna kromatografija so tri vrste kromatografskih tehnik. The ključna razlika med papirno kromatografijo, tankoslojno kromatografijo in kolonsko kromatografijo temeljijo na vrsti stacionarne faze, uporabljene v tehniki kromatografije. Papirna kromatografija uporablja celulozni papir kot svojo stacionarno fazo, tankoslojna kromatografija pa za stacionarno fazo uporablja glinico ali silikagel, medtem ko stolpna kromatografija kot svojo stacionarno fazo uporablja stolpec, napolnjen s primernim matriksnim materialom..
V procesu ločevanja in identifikacije biomolekul, kot so beljakovine in ogljikovi hidrati, je kromatografija pomembna biofizikalna tehnika. Kromatografija loči spojine glede na njihovo topnost, velikost in naboj. Na podlagi ločevalnega mehanizma kromatografija uporablja mehanizme, kot so ionska izmenjava, absorpcija, izključitev particij in velikosti in obstajajo tri kromatografske tehnike; in sicer papirna, tankoslojna in stolpna kromatografija. Papirna kromatografija temelji na adsorpciji trdne tekočine in topnosti spojine in kot stacionarno fazo uporablja celulozni papir. Tankoslojna kromatografija temelji na adsorpciji molekul trdna tekočina. Ima stacionarno fazo, ki je običajno izdelana iz glinice ali silikagela, in mobilno fazo, ki je topilo. Stolpna kromatografija uporablja stolpec, napolnjen z matrico, ki se uporablja za ločevanje molekul predvsem na podlagi njihove velikosti, afinitete ali naboja.
VSEBINA
1. Pregled kromatografije in ključne razlike
2. Kaj je papirna kromatografija
3. Kaj je tankoslojna kromatografija
4. Kaj je stolpna kromatografija
5. Podobnosti kromatografije papirja, tankega sloja in stolpca
6. Primerjava ob strani - kromatografija papirja proti tanki plasti proti stolpcu v tabeli
7. Povzetek
Kaj je papirna kromatografija?
Papirna kromatografija je najpreprostejša vrsta kromatografije, ki se uporablja in je ne uporablja za obsežne raziskave. V študentskih laboratorijih se večinoma uporablja za identifikacijo biomolekul, kot so aminokisline in ogljikovi hidrati v mešanicah. Papirna kromatografija uporablja stacionarno fazo, ki je narejena z uporabo celuloznega papirja ali filtra papirja Whatman in mobilno fazo, ki se običajno pripravi z organskimi topili, kot je n-butanol itd. Stacionarna faza je nasičena z vodo, zaradi česar je stacionarna faza tekoča. Tako, ko spojine opazimo in pustimo, da tečejo v prisotnosti mobilne faze, odvisno od topnosti spojin, jih ločimo. Tako lahko po razvoju kromatograma naredimo obarvanje, da določimo dolžino vsake spojine. Zato se lahko izračuna retencijski faktor.
Slika 01: Papirna kromatografija
Kromatografijo na papirju lahko nadalje razvrščamo kot naraščajočo kromatografijo na papirju in padajočo kromatografijo na papirju, odvisno od smeri tekočega topila.
Kaj je tankoslojna kromatografija?
Tankoslojna kromatografija oz TLC je pogosto uporabljena tehnika prepoznavanja različnih aminokislin, ki so prisotne v mešanici ali za identifikacijo beljakovin. Tehnika ločevanja temelji na adsorpciji trdne tekočine. Med tankoplastno kromatografijo se kot stacionarna faza uporablja plošča iz glinice ali silikagela. Mešanica topil je odvisna od zahteve in lahko za pripravo topila uporabimo različne kombinacije organskih spojin, kot so n-butanol, ocetna kislina in voda. Spojine, ki jih je treba ločiti, opazimo na plošči in potopimo v zmes topila. Ko topilo potuje na podlagi kapilarnega delovanja plošče, se spojine, opažene na plošči, premaknejo tudi glede na njihovo topnost v topilu.
Slika 02: Tankoslojna kromatografija
Odkrivanje pik po kromatogramu se izvede z različnimi postopki obarvanja. Nekateri uporabljajo obarvanje z ninhidrinom, kar je dokaj strupena metoda obarvanja. Sodobni tankoplastni kromatogrami uporabljajo fluorescenčne tehnike za ogled kromatograma po teku. Glede na prevožene razdalje je mogoče izračunati čas zadrževanja vsake spojine. To je mogoče uporabiti za določitev vrste ločenih spojin na podlagi uporabljene mešanice. TLC se v glavnem uporablja za identifikacijo aminokislin v beljakovinski mešanici in za ločevanje različnih vrst monosaharidov, ki so prisotni v mešanici.
Kaj je stolpna kromatografija?
Stolpna kromatografija je širok pojem, ki se uporablja za opisovanje številnih vrst kromatografskih tehnik, ki uporabljajo ločevalno metodo ločevanja. Pri kolonski kromatografiji se za ločevanje spojin uporablja fizična kolona z embalažnim materialom. Ločitev lahko temelji na različnih fizikalnih lastnostih, ki jih kažejo spojine. Te lastnosti so lahko polnjenje, velikost, 3D konformacija in sposobnost vezave itd. Tako stolpec, napolnjen z matriksnim materialom, deluje kot stacionarna faza, pralni pufer, ki se uporablja na stolpcu, pa deluje kot mobilna faza.
Če se molekule ločijo glede na velikost, je embalažni material pakiran tako, da pušča pore, da spojine potujejo skozi. Tako se prve eluirajo večje molekule, ki ne morejo priti skozi pore, medtem ko manjše molekule trajajo veliko dlje časa, da se eluirajo.
Slika 03: Stolpna kromatografija
Če se molekule ločijo na podlagi njihovega naboja, bo stacionarna faza vsebovala anionski ali kationski izmenjevalec, kamor se bodo spojine pritegnile glede na njihov naboj. Tako se med korakom pranja nevezane spojine eluirajo. Po dodajanju elucijskega puferja se vezane napolnjene spojine eluirajo. Detekcija teh eluentov večinoma temelji na spektrofotometričnih tehnikah.
Kakšne so podobnosti med papirno tanko plastjo in kromatografijo na stolpcih?
- Vse papirne tankoslojne in stolpne kromatografije se uporabljajo tri tehnike za ločevanje biomolekul, kot so aminokisline, beljakovine in ogljikovi hidrati.
- Tehnike papirne tankoslojne in stolpne kromatografije imajo mobilno in stacionarno fazo.
- Tehnike papirne tankoslojne in stolpne kromatografije uporabljajo biofizične mehanizme za ločevanje.
Kakšna je razlika med papirno tanko plastjo in kromatografijo stolpcev?
Papir proti tankem sloju proti stolpni kromatografiji | |
| Papirna kromatografija | Papirna kromatografija je kromatografska tehnika, ki se uporablja za ločevanje spojin, ki temeljijo na adsorpciji tekočina-tekočina in topnost spojine. Kot stacionarno fazo uporablja celulozni papir. |
| Tankoslojna kromatografija | Tankoslojna kromatografija je še ena kromatografska tehnika, ki temelji na adsorpciji molekul trdna tekočina. Ima stacionarno fazo iz glinice ali silikagela in topilo kot mobilno fazo, ki je topilo. |
| Kromatografija stolpcev | Stolpna kromatografija uporablja stolpec, napolnjen z matrico, ki se uporablja za ločevanje molekul predvsem na podlagi njihove velikosti, afinitete ali naboja. |
| Stacionarna faza | |
| Papirna kromatografija | Papir iz nitroceluloze Whatmana se uporablja kot stacionarna faza v papirni kromatografiji. |
| Tankoslojna kromatografija | Kot stacionarna faza tankoslojne kromatografije se uporablja glinica ali silikagel. |
| Kromatografija stolpcev | Kot stacionarna faza v kolonski kromatografiji se uporablja kolona, napolnjena s primernim embalažnim materialom. |
| Mobilna faza | |
| Papirna kromatografija | Tekoče topilo je mobilna faza kromatografije papirja. |
| Tankoslojna kromatografija | Tekoče topilo je mobilna faza tankoslojne kromatografije. |
| Kromatografija stolpcev | Pralni pufer je mobilna faza kromatografije kolone. |
| Mehanizmi, ki se uporabljajo za ločevanje | |
| Papirna kromatografija | Papirna kromatografija temelji na absorpciji trdne tekočine. |
| Tankoslojna kromatografija | Tankoslojna kromatografija temelji na absorpciji trdne tekočine. |
| Kromatografija stolpcev | Stolpna kromatografija temelji na izključitvi velikosti, naboja in oblike. |
| Elucijski pufer | |
| Papirna kromatografija | Ne potrebuje papirne kromatografije. |
| Tankoslojna kromatografija | Ni potrebno za tankoplastno kromatografijo. |
| Kromatografija stolpcev | Zahteva se pri kolonski kromatografiji. |
| Zaznavanje | |
| Papirna kromatografija | Obarvanje in z določitvijo retencijskega faktorja. |
| Tankoslojna kromatografija | Obarvanje in z določitvijo retencijskega faktorja. |
| Kromatografija stolpcev | Spektrofotometrična določitev. |
Povzetek - Paper Thin Layer vs Stolpec Kromatografija
Papirna kromatografija, TLC in stolpna kromatografija so tehnike ločevanja, ki se uporabljajo za ločevanje biomolekul, kot so beljakovine, aminokisline in ogljikovi hidrati (predvsem monosaharidi). Papirna kromatografija uporablja celulozni papir kot stacionarno fazo, mehanizem ločevanja pa temelji na adsorpciji trdne tekočine. TLC uporablja tudi adsorpcijske mehanizme trda tekočina. Molekule so ločene na stacionarni fazi, odvisno od njihove topnosti v mobilni fazi. S kolonsko kromatografijo se ločijo fizikalne lastnosti, kot so velikost, oblika, naboj in molekulska teža spojine. Stolpec, napolnjen z materialom matriksa, deluje kot stacionarna faza, medtem ko pralni pufer deluje kot faza topila. To je razlika med papirno tanko plastjo in kolonsko kromatografijo.
Referenca:
1.Clark, Jim. "Tanka slojevita kromatografija." Tankoslojna kromatografija, 2007. Na voljo tukaj
2.Coskun, Ozlem. "Tehnike ločevanja: kromatografija." Northern Clinics of Istanbul, Kare Publishing, 2016. Dostopno tukaj
Vljudnost slik:
1. „Rezervoar za kromatografijo“ (CC BY-SA 3.0) prek Commons Wikimedia
2.'Tlc zaporedje 'med Quantockgoblin, (Public Domain) prek Commons Wikimedia
3. „Stolpna kromatografija“ (Public Domain) prek Commons Wikimedia
