Razlika med neposrednim in posrednim ELISA

Ključna razlika - Neposredna in posredna ELISA
 

Encimski imuno test (ELISA), znan tudi kot encimski imuno test, je serološki test, ki odkrije protitelesa v krvi. Uporablja se kot diagnostično orodje, s katerim lahko ugotovimo, ali je bil bolnik izpostavljen določeni vrsti virusa ali drugemu povzročitelju infekcije (antigenu) in ali je telo proizvedlo protitelesa proti okužbi. ELISA lahko prepozna tudi pretekle in sedanje okužbe. Zato zdravniki ELISA pogosto uporabljajo kot predhodni preskusni test pred poglobljeno analizo bolezni. Ta test se lahko opravi v laboratoriju z odvzemom vzorca krvi pri bolniku. Obstajata dve vrsti preskusa ELISA: neposredna ELISA in posredna. Ključna razlika med neposrednim in posrednim ELISA je v tem indirektna ELISA je občutljivejša in zahteva dodajanje sekundarnega protitelesa medtem neposredna ELISA je manj občutljiv in uporablja samo primarno protitelo.

VSEBINA
1. Pregled in ključne razlike
2. Kaj je neposredna ELISA
3. Kaj je posredno ELISA
4. Primerjava drugega ob drugem - neposredna in posredna ELISA
5. Povzetek

Kaj je neposredna ELISA?

ELISA je diagnostični test bolezni, ki se izvaja za ugotavljanje prisotnosti določenih antigenov ali protiteles v krvi. Izvede se kot ploščni test. Uporablja protitelesa, povezana z encimi, ki se zlahka analizirajo. Prisotnost antigenov v vzorcu seruma se veže s specifičnimi protitelesi, povezanimi z encimi. V zadnjem koraku se doda poseben substrat za reakcijo z encimom. Encim pretvori substrat v barvni izdelek ali signal, ki ustvarja signal. Sprememba barve kemičnega substrata razkrije prisotnost določenega protitelesa v vzorcu seruma. Neposredni test ELISA uporablja samo primarno protitelo, povezano z encimom. Po vezavi na antigen hitro spremeni barvo, kar kaže na prisotnost povzročitelja infekcije v krvi. Intenzivnost signalov pa je pri neposredni ELISA šibkejša, saj so epitopi omejeni na vezavo antigenov. Zato je neposredna ELISA manj občutljiva v primerjavi z indirektno.

Slika 01: Neposredni test ELISA

Kaj je posredna ELISA?

ELISA lahko izvedemo z uporabo dveh vrst protiteles, in sicer; primarno protitelo in sekundarno protitelo. Neposredno orodje ELISA uporablja obe vrsti protiteles, da ojača signale za boljše zaznavanje. Posredna tehnika ELISA se izvaja na naslednji način.

1. Plošče inkubiramo z antigeni in operemo, da preprečimo nespecifično vezavo.
2. Nato dodamo primarna protitelesa in izperemo.
3. Dodajo in izperejo sekundarno protitelo, povezano z encimom.
4. Doda se substrat in pusti, da reagira z encimi.
5. Zaznajo se signali in ugotovi se prisotnost ali odsotnost specifičnega antigena v vzorcu.

Pri indirektnem testu ELISA se lahko več sekundarnih protiteles veže na eno primarno protitelo. Sekundarna protitelesa so povezana z encimi, ki se zlahka analizirajo. Zato lahko ena vezava naredi močan signal zaradi več interakcij. Zato je posredna ELISA občutljivejša od neposredne ELISA. Vendar lahko posredna ELISA oddaja nespecifične signale zaradi navzkrižnih reakcij sekundarnih protiteles.

Slika 02: Posredni test ELISA

Kakšna je razlika med neposrednim in posrednim testom ELISA?

Neposredno proti posredni ELISA
Neposredna ELISA je manj občutljiva v primerjavi z indirektno ELISA.	Neposredna ELISA je občutljivejša.
Vzeti čas
Neposredni test ELISA je hiter postopek.	Posredna ELISA je zamudna.
Uporaba protiteles
Pri neposredni ELISA se uporabljajo samo ene vrste protiteles (primarna protitelesa).	Primarna in sekundarna protitelesa se uporabljajo za indirektno ELISA.
Povezava z encimi
Primarna protitelesa so povezana z encimi.	Sekundarna protitelesa so povezana z encimi.
Navzkrižna reaktivnost drugih protiteles
Neposredna ELISA odpravlja navzkrižno reaktivnost drugih protiteles.	Neposredna ELISA vpliva na navzkrižno reaktivnost drugih protiteles.
Signali
Signali so v primerjavi z indirektnim ELISA šibki.	Signali so ojačani v posredni ELISA. Zato ga je enostavno zaznati.

Povzetek - Neposredna proti posredni ELISA

ELISA je biokemična tehnika, ki se uporablja predvsem v imunologiji za odkrivanje prisotnosti protitelesa ali antigena v krvnem vzorcu pacienta. Izvajamo ga lahko z dvema procesoma, poznanima kot neposredna ali posredna ELISA. Neposredni test ELISA uporablja samo primarna protitelesa za zaznavanje antigena, medtem ko indirektna ELISA uporablja tako primarna kot sekundarna protitelesa. Pri neposredni ELISA so primarna protitelesa označena, pri indirektnih ELISA pa sekundarna protitelesa. To je razlika med neposrednim in posrednim ELISA.

Reference
1. "Enzimsko povezan imunosubentni test (ELISA)." Bilten Svetovne zdravstvene organizacije. Ameriška nacionalna medicinska knjižnica, 1976. Splet. 29. marec 2017
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen in J. Van Der Veen. "Enzimsko povezan imunosuorbentni test, ki uporablja označen antigen za odkrivanje imunoglobulinskih protiteles M in A pri toksoplazmozi: primerjava z indirektno imunofluorescenco in dvojnim sendvičevim encimskim testom imunostorbentov." Časopis za klinično mikrobiologijo. Ameriška nacionalna medicinska knjižnica, junij 1983. Splet. 29. marec 2017

Vljudnost slik:
1. "Diagram ELISA" avtorja Cavitri - Lastno delo (CC BY 3.0) prek Wikimedije Commons 
2. "Posredno ELISA" avtorja Cawang - Lastno delo (CC0) prek Commons Wikimedia