Razlika med toplo in hladno tripsinizacijo

Ključna razlika - toplo proti vs Hladno Trippsinizacija
 

Topla in hladna tripsinizacija sta dve metodi, ki se uporabljata za encimsko razčlenitev celic pri gojenju živalskih celic. The ključna razlika med toplo in hladno tripsinizacijo, kot nakazujejo imena, je odvisno od temperature, pri kateri se doda tripsin za celično razčlenitev. V pogojih višjih temperatur (36,5 - 37) se izvaja topla tripsinzacija ⁰C) ker se hladna tripsinizacija izvaja v pogojih z nizko temperaturo.

V procesu primarnega gojenja celic živalskih celic se uporabljajo tri glavne metode, ki so se izkazale za uspešne. Tri metode vključujejo mehansko razčlenitev celic, encimsko razčlenitev celic in primarno tehniko razlaščanja. Encimska razčlenitev celic, ki vodi do izolacije celic, in jo opravi encim, ki razgradi beljakovine, tripsin. Zato je ta postopek znan kot tripsinizacija. Trippsinizacijo lahko izvedemo pod dvema različnima pogojema, in sicer toplo toplo tripsinozacijo in hladno tripsinizacijo. Topla tripsinzacija je metoda obdelave celic s tripsinom v toplih pogojih pri temperaturi 36,5 - 37 ⁰C. Hladna tripsinizacija je postopek obdelave tripsina, ki poteka v hladnejših pogojih, po možnosti v ledu, ki ohranja zelo nizke temperature.

VSEBINA

1. Pregled in ključne razlike
2. Kaj je topla tripsinizacija
3. Kaj je hladna tripsinizacija
4. Podobnosti med toplo in hladno tripsinizacijo
5. Primerjava drug ob drugem - Topla proti hladni tripsinizaciji v tabeli
6. Povzetek

Kaj je topla tripsinizacija?

Trippsinizacijo lahko naredimo za razčlenitev celičnih komponent, da se izolirajo celice, da nastane primarna celična kultura. Trippsin je encim za razgradnjo beljakovin in encimska mešanica, ki se uporablja pri tripsinizaciji, je lahko surov ekstrakt ali prečiščen proizvod. Surovi ekstrakt naj bi bil učinkovitejši pri liziranju beljakovin in razpadu celic, saj vsebuje druge razgradne encime.

Topla trippsinizacija je najpogosteje uporabljena encimska metoda za razčlenitev celic, ki poteka v pogojih z višjo temperaturo. Pred zdravljenjem s tripsinizacijo želeno tkivo nasekljamo na manjše koščke. Omogoča enostaven postopek razčlenitve. Posekano tkivo se nato opere v posebnem mediju, znanem kot medij Dissection Basal Salt.

Po zaključku faze pranja se celice pretvorijo v bučko, ki vsebuje aktivni encim, to je tripsin. Ker ta tehnika pomeni topel protokol tripsinizacije, se tripsin postavi pri temperaturi okoli 37 ⁰C približno štiri ure.

Slika 01: Trypsin

Vsebine se mešajo in mešajo z uporabo metod centrifugiranja za lažji protokol in za pospešitev postopka razdruževanja. Ko je dosežen priporočeni čas, lahko celice dobimo iz supernatanta. Celice, pridobljene iz supernatanta, se nato inkubirajo pri določeni temperaturi in času.

Kaj je hladna tripsinizacija?

Hladna tripsinizacija je druga vrsta tripsinizacije, ki poteka v hladnih pogojih. Pri tej tehniki celice, ki jih sesekljamo in operemo, postavimo v viale na ledu in nato namočimo s tripsinom. Obdobje namakanja je veliko daljše - približno 6 - 24 ur.

Po končanem postopku namakanja se tripsin odstrani iz celičnega lizata, koščki tkiva pa se še naprej inkubirajo pri 37 ⁰C približno 20 - 30 minut. Razčlenitev celic nastane s ponavljanjem pipetiranja tkivne mešanice. To bo omogočilo, da se celice ločijo od membrane in pridejo do supernatanta. Ko so celice v supernatantu, jih inkubiramo in gojimo pri želeni temperaturi in časovnem obdobju.

Metoda hladne tripsinizacije ima več prednosti

• Večji izkoristek živih celic, saj je poškodba celic zmanjšana. Poškodba celic je zmanjšana z uporabo stopenj centrifugiranja.
• Zelo priročna metoda.
• Manj naporno.

Glavna omejitev metode hladne tripsinizacije je, da velikih količin ni mogoče uporabiti v enem primeru.

Kakšne so podobnosti med toplo in hladno tripsinizacijo?

• Tako topel kot hladen postopek tripsinizacije uporablja encim tripsin za razčlenitev celic.
• Za postopke razgradnje celic se v postopkih celične kulture uporabljajo tako topli kot hladni poskusi tripsinizacije.
• V postopkih zdravljenja s toplo in hladno tripsino so celice pridobljene iz supernatanta.

Kakšna je razlika med toplo in hladno tripsinizacijo?

Topla proti hladni tripsinizaciji
Topla tripsinzacija je metoda obdelave celic s tripsinom v toplih pogojih pri temperaturi 36,5 - 37 0.	Hladna tripsinzacija je postopek obdelave tripsina, ki poteka v hladnejših pogojih, po možnosti v ledu, ki ohranja zelo nizke temperature.
Protokol
Narezane koščke tkiva vzdržujemo pri 37 0C neprekinjeno skozi celoten postopek.	Narezane koščke tkiva sprva vzdržujemo pri ledeno hladni temperaturi in nato vzdržujemo pri 37 0.
Temperatura
Topla tripsinizacija se pojavi pri 36.5 - 37 0	Hladna tripsinzacija se pojavi pri ledeno hladnih temperaturah.
Čas porabljen
Manj časa, potrebnega za celoten postopek (približno 4 ure) toplega tripsinizma.	Za hladno tripsinizacijo je potreben daljši čas (približno 6 - 24 ur).
Donos sposobnih celic
Nizka topla tripsinzacija.	Visoka v hladni tripsinizaciji.
Uporaba centrifugiranja
Centrifugiranje je potrebno za razčlenitev celic v topli tripsinizaciji.	Centrifugiranje pri hladni tripsinizaciji ni potrebno.
Začetna količina tkiv za tripsinizacijo
Pri topli tripsinizaciji lahko uporabimo večjo količino tkiva.	Pri hladni tripsinizaciji lahko uporabimo manjšo količino tkiva.
Poškodba celic
Visoka zaradi centrifugiranja v topli tripsinizaciji.	Manj zaradi hladne tripsinizacije.

Povzetek - Toplo proti vs Hladno Trippsinizacija

Trippsinizacija je metoda uporabe encima tripsina, ki razgrajuje beljakovine, za razgradnjo in pripravo primarnih celičnih kultur med procesom gojenja celic. Na podlagi temperatur, uporabljenih med postopkom, obstajata dve glavni tehniki tripsinizma. So topla in hladna tripsinizacija. Topla tripsinizacija se izvaja pri 37 ⁰C ker se hladna tripsinizacija izvaja v ledeno hladnih pogojih. Čeprav hladna tripsinzacija traja dlje časa za dokončanje, naj bi imeli večji izkoristek sposobnih celic. To je posledica dejstva, da je pri hladni tripsinizaciji poškodba celic zmanjšana, saj ne uporablja energičnih korakov centrifugiranja. To je razlika med toplo in hladno tripsinozacijo.

Referenca:

1. "Trippsinizacija." Trippsinizacija - pregled | Znanstvene teme. Na voljo tukaj 
2. "Primarna kultura celic: 3 tehnike (z diagramom)." Razprava o biologiji, 16. oktober 2015. Dostopno tukaj  

Vljudnost slik:

1.'Spletna stran Tripsin 'od Fdardel - Lastno delo, (CC BY-SA 3.0) prek Commons Wikimedia