Razlika med RPLC HP RP in HIC
Share
The ključna razlika med RP HPLC in HIC je to RP HPLC uporablja bolj polarno mobilno fazo in manj polarno stacionarno fazo. Medtem ko HIC uporablja hidrofobno stacionarno fazo, ki omogoča, da se hidrofobne molekule pritrdijo nanjo.
Kromatografija je analitična tehnika, ki pomaga ločiti zmes na njene sestavne dele. Najprej moramo raztopiti vzorec, ki ga moramo ločiti v raztopino. Ta zmes raztopina-snov se imenuje mobilna faza. Nato se mobilna faza prenese skozi drug material, imenovan stacionarna faza. Stacionarna faza določa ločitev komponent. Do ločevanja pride zaradi delitve materiala med gibljivo in nepremično fazo.
VSEBINA
1. Pregled in ključne razlike
2. Kaj je RP HPLC
3. Kaj je HIC
4. Primerjava ob strani - RP HPLC proti HIC v tabeli
5. Povzetek
Kaj je RP HPLC?
Izraz RPLC HP pomeni Tekoča kromatografija z reverzno fazo. Vključuje ločevanje komponent v mešanici glede na hidrofobnost. Hidrofobne komponente v mobilni fazi povezujejo imobilizirane hidrofobne ligande v stacionarni fazi, medtem ko hidrofilni sestavni deli eluirajo skozi stacionarno fazo, ne da bi se pritrdili na površino stacionarne faze.
Slika 01: Aparati za HPLC
Poleg tega ima ta metoda večjo obnovljivost v primerjavi z drugimi kromatografskimi tehnikami, kaže pa tudi široko uporabnost. Zato to metodo uporabljamo v laboratorijih za več kot 75% vseh HPLC metod. Večino časa kot gibljivo fazo uporabljamo vodno mešanico vode z mešljivim polarnim organskim topilom. Tako bo zagotovila pritrditev hidrofobnih komponent v raztopini na površino stacionarne faze.
Kaj je HIC?
Izraz HIC pomeni Kromatografija hidrofobne interakcije. Gre za vrsto obratnofazne HPLC, ta metoda pa se uporablja predvsem za ločevanje velikih biomolekul, kot so beljakovine. Pri tej metodi moramo za izdelavo vzorca biomolekule uporabiti vodni medij. Ker organska topila lahko povzročijo denaturacijo beljakovin. Poleg tega ta tehnika uporablja interakcijo med velikimi molekulami z rahlo hidrofobno površino stacionarne faze. Poleg tega moramo v vzorcu uporabiti visoko koncentracijo soli, ker spodbuja, da se beljakovine zadržijo na embalaži; ta proces imenujemo soljenje. S postopnim zniževanjem koncentracije soli lahko biomolekule ločeno eluiramo glede na njihovo hidrofobnost.
Običajno ta metoda uporablja pogoje, ki so nasprotni pogojem kromatografije z ionsko izmenjavo. Pri tej tehniki moramo najprej skozi kolono prenesti pufersko raztopino, da zmanjšamo raztopino topljenca v vzorcu. Zaradi tega se hidrofobna področja proteina izpostavijo. Kadar pa je molekula bolj hidrofobna, je za pospeševanje vezave potrebno manj soli. Tu najprej eluiramo manj hidrofobnih topil, glede na spremembo koncentracije soli pa zadnjič eluiramo več hidrofobnih topil.
Kakšna je razlika med RP HPLC in HIC?
Kromatografija je analitična tehnika ločevanja komponent v mešanici. RP HPLC in HIC sta dve specializirani kromatografski tehniki. Ključna razlika med RP HPLC RP in HIC je, da RP HPLC uporablja bolj polarno mobilno fazo in manj polarno stacionarno fazo, medtem ko HIC uporablja hidrofobno stacionarno fazo, ki omogoča, da se hidrofobne molekule nanjo prilepijo.
Spodnja infografika povzema razliko med RP HPLC in HIC.
Povzetek - RP HPLC proti HIC
Kromatografija je analitična tehnika ločevanja komponent v mešanici. RP HPLC in HIC sta dve specializirani kromatografski tehniki. Ključna razlika med RP HPLC RP in HIC je, da RP HPLC uporablja bolj polarno mobilno fazo in manj polarno stacionarno fazo, medtem ko HIC uporablja hidrofobno stacionarno fazo, ki omogoča, da se hidrofobne molekule pritrdijo nanjo.
Referenca:
1. "Načini ločevanja HPLC." Vode, na voljo tukaj.
Vljudnost slik:
1. „Pripravljalna HPLC“ avtorja GYassineMrabetTalk & Nx2709; Ta nedoločena W3C vektorska slika je bila ustvarjena s programom Inkscape. - Lastno delo (CC BY 3.0) prek Wikimedije Commons
