Razlika med imunofluorescenco in imunohistokemijo

Ključna razlika - Imunofluorescenca v primerjavi z imunohistokemijo
 

Diagnostika bolezni, ki uporablja molekularno biološke metode, je postala novo področje tehnologije kliničnega laboratorija. Vključuje vse teste in metode za prepoznavanje bolezni in razumevanje vzroka bolezni z analizo DNK, RNK ali izraženih beljakovin v organizmu. Hiter napredek molekularne diagnostike je omogočil osnovne raziskave nalezljivih in nenalezljivih bolezni. Uporabljajo se za določanje sprememb v zaporedju ali nivoju ekspresije v ključnih genih ali proteinih, ki sodelujejo v bolezni. Imunofluorescenca (IF) in imunohistokemija (IHC) sta dve tako široko uporabljeni tehniki v biologiji raka. IF je vrsta IHC, kjer se za analizo monoklonskih in poliklonskih protiteles uporablja metoda zaznavanja fluorescence, medtem ko IHC uporablja kemične metode za odkrivanje monoklonskih in poliklonskih protiteles. To je ključna razlika med IF in IHC.

VSEBINA

1. Pregled in ključne razlike
2. Kaj je imunofluorescenca 
3. Kaj je imunohistokemija
4. Podobnosti med imunofluorescenco in imunohistokemijo
5. Primerjava ob strani - Imunofluorescenca proti imunohistokemiji v tabeli
6. Povzetek

Kaj je imunofluorescenca (IF)?

Imunofluorescenca je tehnika odkrivanja, pri kateri se protitelesa, uporabljena v testu, za namene detekcije označijo s fluorescentnimi barvili ali fluorescentnimi proteini. Označena sekundarna protitelesa lahko povzročijo neželene signale v ozadju; zato IF tehnika temelji na označevanju samega primarnega protitelesa, da bi se med detekcijo izognili neželenim signalom. S to tehniko preprečimo nespecifično vezavo med primarnim in sekundarnim protitelesom in je hitrejše, ker ni vključen sekundarni korak inkubacije. Izboljšana je tudi kakovost podatkov.

Slika 01: dvojno imunofluorescentno obarvanje za BrdU, NeuN in GFAP

Fluorokromi ali fluorescentna barvila so spojine, ki lahko absorbirajo sevanje, po možnosti vznemirjajo ultra vijolično sevanje. Ko delci v vznemirjenem stanju dosežejo osnovno stanje, oddajajo sevanje, ki ga detektor zajame in zazna, da tvori spekter. Zelo pomembno je, da je fluorescenčna nalepka združljiva in stabilna za določeno reakcijo, zato jo je treba pravilno konjugirati na protitelo, da dobimo natančne rezultate. Eden najpogosteje uporabljenih fluorokromov je fluorescein izotiocianat (FITC), ki je zelene barve, največja valovna dolžina absorpcije in emisij pa je 490 nm in 520 nm. Rodamin, drugo sredstvo, ki se uporablja pri IF-ju, je rdeče barve in ima izrazito valovno dolžino valovnih dolžin absorpcije in emisij 553 nm in 627 nm.

Kaj je imunohistokemija (IHC)?

IHC je molekularna metoda testiranja, ki se uporablja za prepoznavanje in potrditev prisotnosti antigena v ciljni celici. Ciljna celica je lahko nalezljiv delec, mikrobni patogen ali maligna tumorska celica. IHC uporablja monoklonska in poliklonska protitelesa za določitev prisotnosti antigenov na celični površini ciljnih celic. Tehnika temelji na vezavi antigen-protitelo. Detekcijski marker je konjugiran na ta protitelesa, da bi odkril prisotnost ali odsotnost določenega antigena. Ti markerji so lahko kemični markerji, kot so encimi, fluorescentno označena protitelesa ali radiooznačena protitelesa.

Slika 02: Rezina miške in možganov, obarvana z imunohistokemijo

Najbolj priljubljena uporaba IHC je v biologiji rakavih celic za ugotavljanje prisotnosti malignih tumorjev, uporablja pa se tudi za odkrivanje nalezljivih bolezni.

Kakšne so podobnosti med imunofluorescenco in imunohistokemijo?

• Imunofluorescenca in imunohistokemija se izvajata v in vitro pogojih.
• Obe tehniki temeljita na antigen-protitelo
• Obe sta zelo hitri tehniki.
• Rezultati teh teh teh izkušenj so ponovljivi.
• Oba sta izboljšala kakovost podatkov.
• Te tehnike se uporabljajo v diagnostiki za raka in nalezljive bolezni.

Kakšna je razlika med imunofluorescenco in imunohistokemijo?

Imunofluorescenca proti imunohistokemiji
IF je tehnika odkrivanja, pri kateri so protitelesa, uporabljena v testu, označena z uporabo fluorescentnih barvil ali fluorescentnih proteinov za odkrivanje.	IHC je tehnika odkrivanja, pri kateri so protitelesa, uporabljena v testu, označena z uporabo kemikalij ali radioaktivnih elementov za odkrivanje.
Natančnost
Natančnost je pri tehniki IF večja kot pri IHC.	Natančnost je v IHC nižja.
Specifičnost
ČE je bolj natančen.	IHC je manj specifičen.

Povzetek - Imunofluorescenca proti imunohistokemiji

Molekularni mehanizmi so prinesli številne spremembe na področju medicine, kar je povzročilo napredne metode molekularnega testiranja, ki so prinesle revolucije na področju diagnostike. Ti izumi so privedli do hitre in natančne identifikacije in potrditve bolezni ter s tem omogočili uspešno dajanje in proizvodnjo zdravil. Te tehnike se uporabljajo tudi v farmakologiji, da bi našli tarče zdravil in potrdili farmakokinetične lastnosti zdravila med presnovo zdravila. IF in IHC sta dve diagnostični metodi, ki temeljita na konceptu vezave antigena in protiteles, čeprav se način odkrivanja v obeh tehnikah razlikuje. ČE uporablja princip fluorescence za odkrivanje antigena, IHC pa zazna antigen za zasnovo kemijske konjugacije. To je razlika med IF in IHC.

Prenesite PDF različico Imunofluorescence proti imunohistokemiji

Lahko prenesete PDF različico tega članka in jo uporabljate za namene brez povezave, kot je navedeno v navodilu. Prosimo, naložite PDF različico tukaj Razlika med imunofluorescenco in imunohistokemijo.

Reference:

1. Aoki, Valéria in sod. "Neposredna in posredna imunofluorescenca." Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, na voljo tukaj. Dostopno 25. avgusta 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha idr. "Uporaba imunohistokemije." Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, avgust 2012, na voljo tukaj. Dostopno 25. avgusta 2017.

Vljudnost slik:

1. "Dvojno imunofluorescentno obarvanje za BrdU, NeuN in GFAP" Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2nd, Liu X. - Intranazalna dobava transformirajočega rastnega faktorja - beta1 pri miših po možganski kapi zmanjša volumen infarkta in poveča nevrogenezo v subventrikularnem območju; PMID 19077183 (CC BY 2.0) prek Commons Wikimedia
2. "Hipotalamus mišičnega tkiva, obarvanega z ABC-imunohistokemijo" Zabbn - Lastno delo (CC BY-SA 3.0) prek Commons Wikimedia