Razlika med GFP in EGFP

The ključna razlika med GFP in EGFP je, da je GFP je beljakovine divjega tipa, vključene v molekularno kloniranje celic, ki niso sesalci, medtem ko je EGFP izboljšan ali oblikovan tip GFP, ki se lahko uporablja na celicah sesalcev.

Molekularno kloniranje je napredna tehnika, ki jo znanstveniki neizmerno uporabljajo pri izražanju beljakovin z rekombinantno tehnologijo. V tehnologiji rekombinantne DNA je potrebno uspešno transformirati rekombinantni vektor, da bi gostil organizem. Zato je treba med postopkom preoblikovanja ugotoviti in potrditi, ali se je gen, ki ga zanima, gostitelj preoblikoval ali ne. Da bi to ocenili, molekularni biologi sprejmejo več tehnik. Izmed teh tehnik je eden reporterski gen. Ti reporterski geni delujejo kot izbirni markerji za izbiro pravilnih transformatorjev. Tako sta Green Fluorescent Protein (GFP) in Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) dva reporterska proteina, ki se uporabljata pri molekularnem kloniranju.

VSEBINA

1. Pregled in ključne razlike
2. Kaj je GFP
3. Kaj je EGFP
4. Podobnosti med GFP in EGFP
5. Primerjava drug ob drugem - GFP proti EGFP v tabeli
6. Povzetek

Kaj je GFP?

GFP je protein divjega tipa, ki vsebuje 238 aminokislinskih ostankov in več izbranih regij aminokislinskih sekvenc, ki ga razlikujejo od ostalih fluorescentnih beljakovin. Poleg tega je bil ta divji protein prvotno v izolaciji od Aequorea Victoria; vrsta meduze. Toda v naravnih pojavih so meduze lahko reagirale na fluorescenco zelene barve kot odziv na določene dražljaje.

Prej je ta koncept presenetil znanstvenike in odločili so se, da ga bodo uporabili na svojih rekombinantnih tehnologijah DNK. Posledično so znanstveniki uporabili to mutantno obliko gena divjega tipa kot reporterski gen v svojih študijah genske ekspresije. Divji gen GFP lahko ustvari protein, ki daje fluorescenco pri sobni temperaturi ali pod UV svetlobo. Zato se ob vstavitvi v transformatorje izrazi in ustvari fluorescenco. Če fluorescenca nastane po postopku transformacije, to potrdi uspešnost procesa transformacije. Z enostavnimi besedami, fluorescenčna emisija signalizira uspešno transformacijo vektorja, ki nosi zanimiv gen v gostitelja.

Slika 01: GFP

Zaradi tega GFP deluje kot in vivo označevalec genske ekspresije. Trenutno se za proizvodnjo GFP uporabljajo tehnike genskega inženiringa. Na voljo so tudi številne izboljšane različice GFP, kot je EGFP. To omogoča učinkovito uporabo GFP v študijah molekularnega kloniranja in genske ekspresije.

Kaj je EGFP?

Izboljšana zelena fluorescentna beljakovina ali EGFP je izboljšana različica GFP. Z enostavnimi besedami lahko opredelimo EGFP kot oblikovano različico divjih vrst GFP. Ko divji tip GFP mutira, povzroči blagodejne učinke. Torej mutirani gen GFP omogoča izražanje novih znakov in kot rezultat tega lahko izdelamo izboljšan GFP z izboljšanimi lastnostmi. Poleg tega lahko uspešno vnesemo mutacije v divji tip GFP z uporabo obsevanja ali kemičnih metod. Ti mutirani geni nato proizvajajo EGFP, ki ima bolj koristne lastnosti.

Slika 02: EGFP

Izboljšane značilnosti EGFP so naslednje;

• Sposoben je oddajati močnejše fluorescenčne signale.
• Ima visoko občutljivost.
• Lahko ga uporabljamo na celicah sesalcev namesto prokariotov in drugih evkariotov nižje ravni.
• Prav tako zagotavlja povečano čistost izdelka.

Zato je v primerjavi z GFP za študije genske ekspresije najboljša izbira EGFP. Vendar je izdelek v primerjavi z GFP dražji.

Kakšne so podobnosti med GFP in EGFP?

• GFP in EGFP sta dva proteina, ki imata možnost oddajanja zelene barve
• Zato oba delujeta kot reporterski proteini v študijah genske ekspresije.
• Prav tako je možno sintetizirati oboje s pomočjo tehnologije rekombinantne DNK.
• Poleg tega je enostavno nadaljevati mutiranje teh dveh vrst za sintezo izboljšanih oblik.

Kakšna je razlika med GFP in EGFP?

Reporterski gen je gen, ki se povezuje z genom, ki ga zanima rekombinantna DNK tehnologija. Označuje uspešno transformacijo rekombinantnega vektorja v gostitelja. Tu sta GFP in EGFP dve vrsti zelenih cvetočih beljakovin, ki delujeta kot reporterski proteini. Ključna razlika med GFP in EGFP pa je, da je GFP divjega tipa, medtem ko je EGFP oblikovana različica GFP. Poleg tega ima EGFP koristnejše lastnosti kot GFP. Na primer, EGFP proizvaja močnejšo fluorescenčno svetlobo in je občutljivejši od GFP. Druga razlika med GFP in EGFP so sistemi, v katerih jih lahko uporabljamo. Sistemi, ki niso sesalci, uporabljajo GFP, medtem ko sistemi sesalcev uporabljajo EGFP.

Spodnja infografija prikazuje razliko med GFP in EGFP v tabeli.

Povzetek - GFP proti EGFP

GFP in EGFP sta reporterski proteini v študijah molekularnega kloniranja in genske ekspresije. GFP je beli divji tip, ki je zeleni fluorescentni protein. Beljakovine so bile sprva izolirane od meduz Aequorea victoria. V nasprotju s tem je EFGP izboljšana oblika proteinov GFP. Je mutant divjega tipa z izboljšanimi lastnostmi. Zato ima EFGP večjo jakost signala in večjo občutljivost. Zato ga lahko uporabljamo na sesalcih. Nasprotno pa je uporaba GFP večinoma samo na prenašalcih, ki niso sesalci. V glavnem je to razlika med GFP in EGFP.

Referenca:

1.Cinelli, RA in sod. "Izboljšana zelena fluorescentna beljakovina kot orodje za analizo dinamike in lokalizacije beljakovin: lokalna študija fluorescence na ravni eno-molekul." Fotokemija in fotobiologija., Ameriška nacionalna medicinska knjižnica, junij 2000. Na voljo tukaj  
2. „PDB101: Molekula meseca: Zeleni fluorescenčni beljakovine (GFP).“ RCSB: PDB-101. Na voljo tukaj

Vljudnost slik:

1. "Fluorescentni beljakovinski film GFP" avtorja Erin Rod - Lastno delo, (CC BY-SA 4.0) prek Commons Wikimedia 
2. ”miška CA2 amigo2 eGFP” avtor Dudek, Serena; Curuana, Douglas; Carstens, Kelly - Lastno delo (CC BY-SA 3.0) prek Commons Wikimedia