Razlika med neposredno in indirektno imunofluorescenco

The ključna razlika med neposredno in indirektno imunofluorescenco je, da je neposredna imunofluorescenca uporablja posamezno protitelo, ki deluje proti ciljni skupini, medtem ko indirektna imunofluorescenca uporablja dve protitelesi za označevanje cilja, ki ga zanima.

Imunofluorescenca ali slikanje celic je tehnika, ki se uporablja za označevanje specifičnega ciljnega antigena s fluoroforom. Tu je fluorofor fluorescentna kemična spojina, ki lahko ob vzbujanju svetlobe ponovno oddaja svetlobo. Ko se fluorofor veže s ciljnim antigenom, omogoča zaznavanje ciljne molekule v vzorcu. Za nadaljnje opisovanje, ko se antigen veže s specifičnim protitelesom, ga lahko konjugiramo s fluoroforjem. Zato je pri opazovanju pod fluorescentnim mikroskopom enostavno zaznati prisotnost ciljnega antigena v vzorcu..

Poleg tega obstajata dve vrsti imunofluorescence; neposredna in posredna imunofluorescenca. Razlika med direktno in indirektno imunofluorescenco je predvsem v številu uporabljenih protiteles in konjugaciji fluoroforja. Se pravi, da se fluorofor v neposredni imunofluorescenci neposredno konjugira s primarnim protitelesom, medtem ko se v indirektni imunofluorescenci konjugira fluorofor s sekundarnim protitelesom.

VSEBINA

1. Pregled in ključne razlike
2. Kaj je neposredna imunofluorescenca
3. Kaj je indirektna imunofluorescenca
4. Podobnosti med neposredno in posredno imunofluorescenco
5. Primerjava drug ob drugem - neposredna vs indirektna imunofluorescenca v tabeli
6. Povzetek

Kaj je direktna imunofluorescenca?

Imunofluorescenca uporablja protitelesa za odkrivanje specifičnih ciljnih antigenov. Neposredna imunofluorescenca je ena od dveh vrst imunofluorescence. Pri neposredni imunofluorescenci sodeluje posamezno protitelo (primarno protitelo) in fluorofor se direktno konjugira s primarnim protitelesom. Po vezavi protitelesa s ciljnim antigenom fluorofor sprosti fluorescenco, ki jo lahko zaznamo s fluorescenčnim mikroskopom.

Slika 01: Neposredna imunofluorescenca

Vendar je neposredna imunofluorescenca draga metoda, saj so primarna konjugirana protitelesa draga v primerjavi s sekundarnimi protitelesi. Kljub temu ne vključuje dodatnega koraka, torej krajše tehnike. Poleg tega se v neposredni imunofluorescenci zmanjšajo nespecifične vezi. Zato je navzkrižna reaktivnost vrst nizka. Toda pri odkrivanju je občutljivost neposredne imunofluorescence v primerjavi s indirektno imunofluorescenco šibka .

Kaj je indirektna imunofluorescenca?

Posredna imunofluorescenca je druga vrsta imunofluorescence, ki vključuje dve vrsti protiteles, kot sta primarna in sekundarna protitelesa pri označevanju ciljnega antigena. Pri tej metodi fluorofor konjugira s sekundarnim protitelesom. Zato ta tehnika vključuje dodaten korak.

Slika 02: Imunofluorescenca

Vendar pa je pri tej metodi občutljivost velika, saj je več fluorofor možno konjugirati na sekundarna protitelesa in olajša odkrivanje. Poleg tega je posredna imunofluorescenca cenejša zaradi dejstva, da je konjugacija sekundarnih protiteles cenejša in enostavnejša. V primerjavi z neposredno imunofluorescenco je pri posredni metodi navzkrižna reaktivnost vrst velika.

Kakšne so podobnosti med direktno in posredno imunofluorescenco?

• Gre za dve vrsti imunofluorescenčne tehnike.
• Primarna protitelesa in fluorofor vključujeta obe metodi.
• Prav tako se reakcija antigen-protitelo pojavi pri obeh metodah.
• Poleg tega tako neposredna kot indirektna imunofluorescenca uporabljata fluorescenčni mikroskop za odkrivanje antigena.

Kakšna je razlika med direktno in indirektno imunofluorescenco?

Imunofluorescenca je lahko neposredna ali posredna, ki temelji na konjugaciji fluoroforja z uporabljenimi protitelesi. Pri neposredni imunofluorescenci se fluorofor konjugira s primarnim protitelesom, kar je posamezno protitelo, ki je vključeno v to tehniko. Nasprotno od tega se pri indirektni imunofluorescenci fluorofor konjugira s sekundarnim protitelesom, ki je eno izmed dveh vrst protiteles, ki sodelujejo v tehniki. Zato je glavna razlika med direktno in indirektno imunofluorescenco tip protiteles, ki se konjugirajo s fluoroforjem.

Naslednja infografija daje primerjavo razlike med direktno in indirektno imunofluorescenco.

Povzetek - Neposredna proti posredni imunofluorescenci

Imunofluorescenca je tehnika, ki se uporablja za odkrivanje prisotnosti specifičnih antigenov v vzorcu. Ta tehnika uporablja specifična protitelesa. Zato pri tem protitelesa konjugirajo s fluorofori, da jih zaznamo s fluorescentnim mikroskopom. Poleg tega obstajata dve vrsti imunofluorescence, in sicer neposredna in posredna imunofluorescenca. Neposredna imunofluorescenca vključuje posamezno protitelo in fluorofor, neposredno konjugiran na to protitelo. Posredna imunofluorescenca vključuje dve protitelesi; primarni in sekundarni ter fluorofor konjugirani na sekundarno protitelo. Ker se lahko več sekundarnih protiteles veže s primarnim protitelesom in več fluorofor se lahko konjugira s sekundarnimi protitelesi, je posredna imunofluorescenca občutljivejša od neposredne metode. Poleg tega je posredna metoda cenejša od neposredne. Tako je to razlika med direktno in indirektno imunofluorescenco.

Referenca:

1. "Imunofluorescenca." Wikipedia, fundacija Wikimedia, 19. avgust 2018. Dostopno tukaj 

Vljudnost slik:

1. "HSP IF IgA" avtorja Emmanuelm z en.wikipedia, (CC BY 3.0) prek Commons Wikimedia
2. "Imunofluorescenca" avtorja Westhayl618 - Lastno delo (CC BY-SA 4.0) prek Commons Wikimedia